细胞培养操作过程要使用超净工作台

目的:建立一套适用的培养操作规程,进行无污染条件下体外细胞扩大培养。

主体内容:
操作步骤:
1、紫外灯照射超净工作台30分钟(根据实际情况,可适当延长或缩短照射时间,但时间长一点总比时间短一点安全。)


2、将培养液、PBS、胰酶放在37℃水浴中温育(每次用多少,温育多少,这样既可节约温育的时间,又可延长药品的使用期限。)


3、超净工作台照射30分钟后,关闭紫外,打开照明,打开排风10分钟后再次进入细胞培养室。(注意:要打开排风10分钟后再进行操作,这样才能保证循环的风是无菌的。同时还会避免有菌的风直接吹到人的呼吸道中,对人体也有一定的保护作用)


4、戴上口罩及手套(有条件的最好戴上帽子,不过也没关系,我们实验室就没戴)


5、用70-75%的酒精擦试实验物品,然后拿入超净工作台中。


6、操作时注意以下几点:尽量在酒精灯火焰附近操作,但如果管子里有细胞就要离火焰有一定距离了,否则细胞要烫死了;不要重复使用移液管(即吸一次后,就换新的管);不要在敞开的容器上方操作;手上的酒精不要擦太多,否则靠近酒精灯时容易把手烧到(我想很多人都有过被烧的经历吧);


其实操作是很简单的,但一定要仔细。尤其是第2步许多人都不注意,细胞平时放在37℃培养,如果加入的PBS或胰酶温度太低,会对细胞有操伤的,虽然这种损伤短期内察觉不到,但时间长了,就会显现出来。

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