无菌室标准化规程

一、目的
本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
 
二、安全注意事项
严格无菌操作,防止微生物污染;操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。
 
三、规程
3.1  无菌室应设有无菌操作间和缓冲间,无菌操作间洁净度应达到10 000级,室内温度保持在20-24℃,湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。
3.2  无菌室应保持清洁,严禁堆放杂物,以防污染。
3.3  严防一切灭菌器材和培养基污染,已污染者应停止使用。
3.4  无菌室应备有工作浓度的消毒液,如5%的甲酚溶液,70%的酒精,0.1%的新洁尔灭溶液,等等。
3.5  无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁,以保证无菌室的洁净度符合要求。
3.6  需要带入无菌室使用的仪器,器械,平皿等一切物品,均应包扎严密,并应经过适宜的方法灭菌。
3.7  工作人员进入无菌室前,必须用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在缓冲间更换专用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手),方可进入无菌室进行操作。
3.8  无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上,并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕,应及时清理无菌室,再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
3.9  供试品在检查前,应保持外包装完整,不得开启,以防污染。检查前,用70%的酒精棉球消毒外表面。
3.10  每次操作过程中,均应做阴性对照,以检查无菌操作的可靠性。
3 .11  吸取菌液时,必须用吸耳球吸取,切勿直接用口接触吸管。
3.12  接种针每次使用前后,必须通过火焰灼烧灭菌,待冷却后,方可接种培养物。
3.13  带有菌液的吸管,试管,培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒,24小时后取出冲洗。
3.14  如有菌液洒在桌上或地上,应立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟,再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时,应立即脱去,高压蒸汽灭菌后洗涤。
3.15  凡带有活菌的物品,必须经消毒后,才能在水龙头下冲洗,严禁污染下水道。
3.16  无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下,取内径90 mm的无菌培养皿若干,无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15 ml,放至凝固后,倒置于30~35℃培养箱培养48小时,证明无菌后,取平板3~5个,分别放置工作位置的左中右等处,开盖暴露30分钟后,倒置于30~35℃培养箱培养48小时,取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落,10 000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度,应对无菌室进行彻底消毒,直至重复检查合乎要求为止。

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