微生物实验室基本要求

 1.办公室


实验室的办公室是检验工作人员办公、信息查询和实验室管理工作的地方,其面积应在20m2左右(可根据人员数量进行调整),通风采光好,内设基本的办公桌、椅、电脑、打印机、存放资料和留样的柜等。检验工作人员可以在办公室里登记待检验的样品、出检验报告和处理有关的文件资料等,也可供工作人员在工作过程中放松休息,以便更清醒地思考、分析和解决问题,极大地提高工作效率。


2.准备室


准备室用于配制培养基、药品和样品处理等。主要设备有药品柜、存放器具或材料的专柜、实验台。实验台材料应以耐热、耐酸、耐碱为宜。边台上放置电炉,药品柜可分门别类地存放一些一般药品及试剂。易挥发刺激性气味或有害气体药品应在通风橱中使用。冰箱用于储存需冷藏的实验样品、药品或试剂。各种玻璃器皿(如试管、烧杯、容量瓶、试剂瓶、锥形瓶、玻璃棒)可分类放置。室内需设有多处水龙头、下水道、电源插座。准备室应设有水电总控制阀。


3.洗涤室


洗涤室主要用于洗刷器皿。由于使用过的器皿已被微生物污染.有时还会存在病原微生物。因此,在条件允许的情况下,最好设置洗涤室。洗涤室应设有洗涤区、制水区。室内应备有加热器、蒸锅、超声波清洁器,及洗刷器皿用的盆、桶等,回收用的废物缸、废液缸。还应有各种瓶刷、玻璃珠、试管架、晾干架、洗瓶、喷壶、洗涤剂(去污粉、肥皂、洗衣粉、洗洁精)、消毒液(新洁尔灭、酒精、次氯酸、过氧乙酸)。


4.灭菌室


灭菌室是培养基及有关的检验材料灭菌的场所。灭菌设备是高压设备,具有一定的危险性.所以灭菌室应与办公室保持一定距离以保证安全,使用时应有专人操作.但也要方便工作,通常设在通用实验室附近并与之保持一定距离(如隔一条走廊的距离或小房间的距离).以减少影响。灭菌室内安装有灭菌锅等灭菌设备。另外,灭菌室里应水电齐备并有防火措施和设备,人员要遵守安全操作制度。灭菌室主要用于培养基、各种器具及使用后被污染的物品的灭菌,室内应备有高压蒸汽灭菌器、干热灭菌烘箱灭菌设备。一般产品分装至包装容器后再灭菌,也可选用过滤除菌法达到无菌保证要求。气体灭菌法是在充有灭菌气体的高压腔室内进行。灭菌室中应备有化学杀菌剂,如重金属离子、某些强氧化剂、抗生素。


5.更衣室


更衣室是进行微生物检验时进入无菌室之前工作人员更衣、洗手的地方,室内设置无菌室及缓冲室的电源控制开关和放置无菌操作时穿的工作服、鞋、帽子、口罩等。有时还设有装有鼓风机的小型房间,其作用是减少工作人员带人的杂菌,但相应其成本也很高。


6.缓冲室


缓冲室是进入无菌室之前所经过的房间,安装有鼓风机,以减少操作人员进人无菌室时的污染.保证实验结果的准确性。进口和出口通常是呈对角线位置,以减少空气直接对流造成的污染。要求比较高的微生物检验项目如致病菌的检验,应设有多个缓冲室。


7.无菌室


无菌室也称接种室,是系统接种、纯化菌种和微生物检验过程等无菌操作的专用实验室。在微生物检验工作中,菌种的接种移植是一项主要操作,这项操作的特点就是要保证菌种为纯种,防止杂菌的污染。在一般环境的空气中,由于存在许多尘埃和杂菌,很易造成污染,对接种工作干扰很大。因此,接种工作要在空气经过灭菌的环境里进行,小规模的可利用超净工作台.大规模的则在无菌室里操作。无菌室是用于无菌操作的场所,要求密封、清洁.安装紫外灯和空调设备(带过滤设备)及传递物品用的传递小窗,传递小窗应向缓冲室内开口以减少污染和方便工作。另外.无菌室内还应配备超净工作台和普通工作台。有条件的实验室可设置生物安全柜


无菌室设置及使用的正确与否直接影响了项目检验的成败.我们在这里对无菌室进行重点介绍。


(1)无菌室的设置


无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点:


①无菌室应有内、外两间.内问是无菌室,外间是缓冲室。房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。内间面积2m×2.5m—5m2,外间面积1m×2m=2m2,高以2.5m以下为宜,都应设有天花板。墙壁与地面和天花板连接处无缝隙,不留死角。无菌室六面光滑平整,能耐受清洗消毒。


②内间应当设拉门,以减少空气的波动.门应设在离工作台最远的位置;外问的门最好也用拉门,门缝要封紧,两门应错开.以免空气对流造成污染。外间的门要设在距内间最远的位置。


③在分隔内间与外间的墙壁或“隔窗”上.应开一个小窗.作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内问的次数,降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm,内外都挂对拉的窗扇。


④无菌室容积小而严密,使用一段时间后,室内温度很高,故应没置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上(即离工作台最远的位置).最好为双层结构,外层为百叶窗,内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启,以流通空气。有条件可安装恒温设备。


(2)无菌室内设备和用具


①无菌室内的工作台,不论是什么材质、用途的,都要求表面光滑和台面水平。光滑是便于用消毒药剂擦洗,水平是在倒琼脂平板时可以保证培养皿内平板的厚度一致。


②在内室和外室各安装一个紫外灯(多为30W)。内室的紫外灯应安装在经常工作的座位正上方,离地面2m,外室的紫外灯可安装在外室中央。


③外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏尔水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。


④内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀(剪、镊子)、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。


⑤试管、培养皿、枪头、锥形瓶、EP管等器皿和培养基均可用高压蒸汽灭菌器灭菌:首先将待灭菌的器皿或培养基分装好,用报纸包裹严实.通过棉线捆扎牢固,避免空气污染。检查灭菌器中蒸馏水量是否充足,检查每个阀门及开关是否工作正常,然后将待灭菌的物品放入高压蒸汽灭菌锅.打开电源.调制温度和时间。干热灭菌箱可用于制药行业的西林瓶、安瓿瓶、铝盖、金属及玻璃器皿件灭菌去热原和固体物料干燥灭菌。


8.恒温培养室


每一类微生物生长所需的温度范围各不相同,且各有其最适温度。如果温度较低,则微生物代谢低下,生长缓慢。如果温度适宜,则微生物代谢旺盛,生长快。如果温度太高,则会因为高温导致蛋白质变性,使酶失去活力而抑制生长,甚至引起死亡。恒温培养室就是对接种微生物提供恒定适宜温度进行培养的场所。


(1)培养室的设置


①培养室应有内、外两间,内室是培养室,外室是缓冲室。房间容积不宜太大.以利于空气灭菌.内室面积在3.2m×4.4m=14m2左右,外室面积在3.2m×1.8m=6m2左右,高以2.5m左右为宜,都应有天花板。


②分隔内室与外室的墙壁上部应设带空气过滤装置的通风口,使内室有良好的空气供应,以满足好氧微生物对氧的需要。


③为满足微生物对温度的需要.需安装恒温恒湿机。恒温恒湿机的主机部分应安装在内室以外。


④内外室都应在室中央安装紫外灯,以供灭菌用。


(2)培养室内设备及用具


①内室通常配备培养架和摇瓶机(摇床)。常用的摇瓶机有旋转式、往复式两种。


②外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、手持喷雾器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。


③培养室的灭菌、消毒。同无菌室的灭菌、消毒措施。小规模的培养可不启用恒温培养室,而在恒温培养箱中进行。


9.通用实验室


通用实验室是进行微生物检验准备工作和非无菌操作实验时使用,也可供进行微生物的观察、计数和生理生化测定及科研工作使用。室内的陈设因工作侧重点不同而有很大的差异。一般均配备实验台、显微镜、柜子及凳子。实验台要求平整、光滑,实验柜要足以容纳日常使用的用具及药品等。通用实验室应设有较大的长方形工作台作为实验操作台,台下设计了各专用仪器柜,台面用石板加塑胶垫等不易腐蚀和稳固耐用的材料设置,并设有专用搁物架。另外,还应设置一个适当大小的通风橱,内配有排气系统和安装给排水系统,如水槽及水槽上的各种水龙头。实验室的地面设计为水磨石地面,这样容易清洁,不易积水,方便工作。实验室应有良好的通风照明设备和消防设施。通用实验室为了方便实验工作的开展,通常配备了常用的仪器(分光光度计、pH计、烘箱、电炉等)及常用的各种玻璃器皿和常用的各种化学试剂、药品。此外,还应配有清洁用工具和工作服。如果工厂条件许可.检验人员可以根据分工各自拥有专用的实验工作台或工作地方,以快速、高效完成检验任务。


教学用的微生物实验室,通常按80m2/40人设计,最好是长方形,应设置讲台、黑板、实验桌。实验桌上配有药品架,在药品架的适当高度安装日光灯.作为观察微生物时的光源。


10.实验室其他要求


总的来说,在非专业化实验或条件有限时,准备室、洗涤室、通用实验室的划分并不十分明确.甚至合而为一。在专业化研究或条件允许的情况下,上述九室最好都单独设置。


微生物实验很重要的一点是要保持实验的安全性、有效性及连续性。在实验室的建设过程中,要确保水力、电力、动力等的充足供应,同时要合理安置排污系统,便于实验废弃物及污染物的排放。

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